如何制備蛋白質(zhì)電泳凝膠？

你知道該如何制備蛋白質(zhì)電泳凝膠嗎？讓我們一起來看看吧！

一、制備方法

1. 根據(jù)垂直電泳槽說明書安裝玻璃板，確定需配制分離膠的濃度和體積，配制所需分離膠；

2. 迅速將分離膠注入兩玻璃板間隙中，留出灌注積層膠所需空間（梳子的齒長再加1cm，用滴管小心地在分離膠上覆蓋一層0.1% SDS（當(dāng)丙烯酰胺濃度≤8%時(shí)）或異丁醇或水（當(dāng)丙烯酰胺濃度≥10%時(shí)），覆蓋層可防止氧擴(kuò)散進(jìn)入凝膠而抑制聚合反應(yīng)。將凝膠垂直置于室溫下；

3. 分離膠聚合wan全后，倒出覆蓋層液體，用去離子水洗滌凝膠頂部數(shù)次以除去未聚合的丙烯酰胺，盡可能排除凝膠上的液體；

4. 確定需配制濃縮膠的體積，配制所需濃縮膠，然后直接將濃縮膠灌注在分離膠上，立即插入干凈的配套梳子，避免氣泡，然后加入濃縮膠溶液以充滿梳子之間的空隙。待濃縮膠聚合后，拔出梳子，形成加樣孔；

5. 用去離子水將電泳緩沖液貯存液稀釋5倍，倒入電泳槽，將加樣孔充滿，這時(shí)加樣孔中的氣泡可通過電泳緩沖液排除。

二、常見問題

1. 濃縮效應(yīng)：樣品在開始電泳時(shí)，通過濃縮膠濃縮成高濃度的樣品薄層；

2. 電荷效應(yīng)：在均一電勢(shì)梯度和PH的分離膠中，由于各蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同所帶電荷量不同，在電場(chǎng)中所受到的引力不同，經(jīng)過一段時(shí)間的電泳，各種蛋白質(zhì)就以一定順序排列成一條條蛋白質(zhì)區(qū)帶；

3. 有分離膠孔徑較小，分子量大小和分子形狀不同的蛋白質(zhì)通過分離膠后，所受的阻滯程度不同，因而遷移率不同而被分離。