BAS與酶聯(lián)免疫試劑盒的結(jié)合

BAS酶聯(lián)免疫試劑盒吸附試驗(yàn)是ELISA的一種改良技術(shù)，將BAS，即生物素-親和素系統(tǒng)引入ELISA，很大程度上提高了ELISA的靈敏度。

一、親和素和生物素

1.親和素：

       給動(dòng)物飼喂大量卵白蛋白后，可引起生物素缺乏癥，此后證明，卵白蛋白中存在一種對(duì)生物素有異常親和力的堿性蛋白，稱之為抗生物素蛋白或卵白素，均稱為親和素。親和素存在于卵白蛋白中，故可從雞蛋白清中提取親和素，由四個(gè)相同的亞基組成的堿性糖蛋白，分子量6.6～6.8萬(wàn)，等電點(diǎn)為10.5，由于每個(gè)亞基都可以結(jié)合一個(gè)生物素分子，所以親和素呈四價(jià)反應(yīng)性，在血清學(xué)反應(yīng)中，可以產(chǎn)生新的放大作用。

2.生物素：

       即維生素H，主要存在于卵黃、腎、肝等組織中，除可提取外，也能人工合成，另外在動(dòng)植物體內(nèi)也廣泛存在，系結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的小分子物質(zhì)，分子量244.31，它不能直接與親和素結(jié)合，需活化后，產(chǎn)生生物素衍生物（即生物素酰羥基丁二酰亞胺，BNHS，為白色結(jié)晶，熔點(diǎn)200～202℃）才能與親和素結(jié)合。另外，它還能高比度地偶聯(lián)抗體等反應(yīng)物質(zhì)和酶等標(biāo)記材料，分別制成生物素化抗體和生物素化酶等，在免疫反應(yīng)中起到一級(jí)穩(wěn)定的放大作用。

二、BAS酶聯(lián)免疫試劑盒吸附試驗(yàn)的技術(shù)類型，該檢測(cè)系統(tǒng)可分為以下兩類：

1.BAB法：

      即以游離的親和素分別橋聯(lián)生物素化抗體和生物素化酶的檢測(cè)方法。目前最-常用的是本法的改良法，預(yù)先使親和素與生物素化酶形成復(fù)合物，再使其與生物素化抗體反應(yīng)，因而叫做ABC法，此法既減少了反應(yīng)步驟，又因ABC網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可網(wǎng)絡(luò)數(shù)量極為可觀的酶分子，從而使BAS的靈敏度又得到了進(jìn)一步的提高。

2.BA法：

       即直接以酶標(biāo)親和素聯(lián)接生物素化抗體，檢測(cè)抗原的方法。為簡(jiǎn)化反應(yīng)程序，廠家試制了酶聯(lián)BAS試劑，連接被檢測(cè)的免疫反應(yīng)系統(tǒng)是生物素化抗體，即生物素化抗抗體羊抗兔和兔抗小鼠及一種生物素化抗體生物素化馬抗人。較常用的生物素化酶是生物素化辣根過(guò)氧化物酶。

三、BAS ELISA在檢測(cè)工作中的應(yīng)用：

該技術(shù)應(yīng)用最多的一個(gè)方面就是檢測(cè)可溶性抗原如細(xì)菌和病毒等，以及它們相應(yīng)的抗體。

1. 細(xì)菌性抗原的檢測(cè)Yolken等采用雙抗體夾心ABC ELISA法檢測(cè)流感桿菌b型、肺炎球菌和鏈球菌抗原等，先用相應(yīng)抗體包被酶標(biāo)板，然后分別加入細(xì)菌培養(yǎng)上清液、生物素化抗體和親和素與生物素化酶復(fù)合物來(lái)實(shí)施反應(yīng)，本法檢測(cè)的靈敏度比常規(guī)ELISA和熒光抗體法高4～16倍。

2. 病毒性抗原的檢測(cè)病毒性抗原也可用雙抗體夾心法檢測(cè)，如檢出糞便中的輪狀病毒，可用抗體包板，再相繼加入待檢標(biāo)本、生物素化抗體、親和素和3H標(biāo)記的生物素，然后作放射免疫測(cè)定。國(guó)內(nèi)已用BAS 酶聯(lián)免疫試劑盒吸附試驗(yàn)檢測(cè)單純皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、肺炎病毒及其相應(yīng)抗體。